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ELISA实验中牛奶样本的收集方法
点击次数:193 发布时间:2018-12-18

ELISA技术的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

牛奶和奶粉前处理方法

(a)牛奶前处理方法

┅┅取牛奶样本,3000g以上,10℃离心10min,吸除上层脂肪;

┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中,加入150ulC液(见配液1)出现沉淀,振荡15s,再加入150ulD液(见配液2),振荡1min充分混合;

┅┅3000g以上,15℃离心10min,移取上层液;

┅┅用复溶工作液(见配液6)以等体积稀释上层液(1份上层液+1份复溶工作液);

┅┅取50ul用于分析。

注:如果离心后仍然浑浊,再重复脱脂过程。   

(b)牛奶前处理方法

┅┅取牛奶样本,3000g以上,10℃离心10min,吸除上层脂肪;

┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中,加入250ulC液(见配液1)和250ulD液(见配液2)充分混合,3000g以上,4~12℃离心10min。(如没有冷冻离心机,请预先将样本冷却到8℃再进行离心);

┅┅移取2。2ml上层液(相当于2ml奶样)至另一个10ml聚苯乙烯离心管中,加入4ml乙酸乙酯上下振荡10min;

┅┅3000g以上,室温(20-25℃)离心10min ;

┅┅移取2ml乙酸乙酯上层有机相(相当于1ml奶样),至10ml干净的玻璃试管中,于50~60℃水浴氮气流下吹干;

┅┅加入0.5ml复溶工作液(见配液6),涡动2min溶解干燥的残留物;

┅┅取50ul用于分析。

    由于阴性样本可能会产生背景干扰 (在某些情况下干扰数值在标准2到3之间),所以推荐0.15ppb作为阳性结果的cut off判断值。

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