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产品名称:Human RBP ELISA

产品型号:

产品报价:1

产品特点:本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中视黄醇结合蛋白 (RBP)的含量。欢迎前来咨询Human RBP ELISA

Human RBP ELISA的详细资料:

  • 有效期:6个月
  • 保存条件:2-8

 

 Human RBP ELISA使用目的

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中视黄醇结合蛋白 (RBP)的含量。

 Human RBP ELISA实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人视黄醇结合蛋白 (RBP)水平。用纯化的人视黄醇结合蛋白 (RBP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入视黄醇结合蛋白 (RBP),再与HRP标记的视黄醇结合蛋白 (RBP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的视黄醇结合蛋白 (RBP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人视黄醇结合蛋白 (RBP)浓度。

 注意事项

  • 本试剂盒仅用于科研,不得用于医学诊断。
  • 使用试剂盒前,请仔细阅读说明书,以试剂盒内的说明书为准,请务必理解说明书内容。
  • 酶标包被板属于可拆型,开封后如未用完,板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。
  • 加样样本和试剂应尽快完成。
  • 避免实验过程中酶标板干燥;清洗后尽快加试剂。
  • 实验开始,所有试剂应平衡到室温 (21-26°C) 后方可进行。温度会影响吸光度值,但不影响样本值。
  • 切忌用口加样,以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。
  • 不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。
  • 操作时带一次性手套,微生物的污染会影响实验结果的正确性。
  • 操作应按照国家规定的安全条列进行。
  • 过期的试剂盒切勿再使用。
  • TMB 底物对皮肤有刺激性,不慎入眼,立即用大量水冲洗,皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂,并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用前应尽快清洗。

 试剂盒组成

1.说明书                             1

2.封板膜                             2

3.酶标包被板                       12×8

4.标准   400 ng/ml                 0.6ml×1

5.标准品稀释液                     2ml×1

6。生物素标记的抗RBP抗体          1.5ml×1

7.显色剂A                        6ml×1

8.显色剂B                        6ml×1

9。终止液                           6ml×1

10。酶标试剂                        6ml×1

11. 30倍浓缩洗涤液                 20ml×1

需要而未提供的试剂和器材

  • 吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。
  • 1-2ml的加样器。
  • 100 ml和1L的量筒。
  • 吸水纸。
  • 37°C 恒温箱。
  • 蒸馏水或去离子水。
  • 数据分析和绘图软件,图纸。
  • 标准和样品稀释的试管。

储存条件

  1. 有效期内的试剂如开封后未用完,请2-8°C 保存。
  2. 过期的试剂请不要用,打开后的试剂2-8°C 保存。
  3. 酶标包被板必须2-8°C 保存,如有未用完的酶标包被板,打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。
  4. 开封后的试剂盒2-8°C只能保存8周。

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

样本处理及要求

  1. 血清-用采血管收集血液,室温血液自然凝固30分钟,1000 xg离心15分钟左右,收集上清,尽早进行实验,或者分装后-20°C -80°C 保存。
  2. 血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂,2-8°C 1000 xg离心15分钟左右,30分钟内收集好,-20°C -80°C 保存,避免反复冻融。
  3. 细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验,或者分装后-20°C -80°C 保存,避免反复冻融。

操作步骤

  1. 注意事项
    • 所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡,混匀试剂时不应起泡沫。
    • 一旦实验开始,各操作步骤都应尽快完成。
    • 避免重复使用手中的吸头和试管,以免交叉污染。
    • 一般情况,酶的反应与时间和温度成正比。
      1. 操作步骤
  1. 标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是:200ng/ml,100 ng/ml,50 ng/ml,25ng/ml,12.5 ng/ml,0 ng/ml,。

在酶标包被板上设标准品孔,依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)。

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗RBP抗体,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加生物素标记的抗RBP抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  2. 温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  6. 温育:操作同3
  7. 洗涤:操作同5
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

实验结果计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。

 

 

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